著作先容了通過C端記號加強肽段從新測序的舉措，總共抬高肽○ 段氨□基酸掩蓋率，并能夠有用辦理序列中各類特定的等質(zhì)料歧義△題目。

　　卵白質(zhì)從新測序（De novo sequencing）是一種不依賴數(shù)據(jù)庫，直接 從質(zhì)譜數(shù)?據(jù)中確 定卵白質(zhì)序列△的時△間。這項時間正在抗體測序、非核糖體肽的序列說明、未注解 生物的卵白質(zhì)外○征以及卵白質(zhì)中新突變的檢測等眾 個范疇施 展 著厲重效率。

　　假使從新測序時間具有強盛的 潛力，但正在實踐操作中卻面對著不少挑…釁。理思環(huán)境下全外顯子組基因檢測★是查什么的< /strong>，所選的MS/MS 碎裂峰應也許審定特定序列片斷中的每個氨基酸，并將一齊檢測到的肽組合■起來以掩蓋全面卵白質(zhì)序列。個中最緊要的題目之一是怎樣確實分辨那些質(zhì)料…相通但化學布局分歧的氨基酸，即同質(zhì)異構(gòu)體。比方，亮氨酸（Leucine， L）和異亮氨酸?（ ?Iso?leuc■ine， I），天冬 氨酸/甘氨酸-甘氨酸（Asparagine/Glyc ine-Glycine， N/GG）和谷氨酰胺/丙氨酸-甘氨酸（○Glutamine/Alanine-Glycine， Q/AG/GA）。這些同質(zhì)異構(gòu)體歧義的存正在極大地擴展了序列大…概性的數(shù)目全外顯子測序價值，從而擴展了探討的紛 亂性○和本錢全外顯子測序和全基因 組測序。

　　能夠使用電子轉(zhuǎn)變/高能碰撞解離（EThcD）出○現(xiàn)特定的離子碎片（w離子）從而分辨異亮氨酸和亮氨酸。使用這 種舉措必要 ○可 電離C端 片斷，最好帶有堿性殘基，比方組氨酸全外顯子測序和全○基因組測序尊龍凱時人生?就博、精氨酸或賴氨酸。尊龍凱時為了得 □…到完好的卵白質(zhì)序列掩蓋?○度，也必要眾 種 酶組合從而○得到■重疊的肽段。然而，特別是正在正 離○子形式下運轉(zhuǎn)的LC-MS中，胃卵白酶、胰凝乳卵白酶、Gl uC和A spN等常用的非胰卵白酶大概無法出□ 現(xiàn)C端片斷（□即y和z 離子）的最佳□電離。

　　為認識決這一挑釁，Le Bihan團隊考試舉辦C端記號全外顯子測序價值 全外顯子測序和全基因組測序，以加強肽的電荷狀況并推進可□電離■C端片斷的出○現(xiàn)。通過正在不影響肽電荷的環(huán)境下阻斷一齊伯胺基團來防備肽-肽酰胺化偶聯(lián)（圖1a），不過實○行證明 省略二甲基化方法不會對結(jié) 果出現(xiàn)明顯影響。無論是天冬氨酸、谷氨酸的側(cè)鏈照舊C端，肽羧酸的衍 生化都▽能夠正在EDC /○OXYMA或PyAOP★等偶○聯(lián)試 劑存鄙人用伯胺分子（胺試劑）落 成。這個探討入選擇的帶正電荷的胺分子是精■氨 酸甲酯（R-met），這種裝點擴展了電荷狀況并擴展了170。1168 am △u的質(zhì)料（圖 1a ）。如圖 1b所 示尊龍凱時人生就博，依據(jù)w離子出現(xiàn)z離子的質(zhì)料耗損來分辨亮氨酸與異亮氨酸，亮氨酸因…為 異○丙基損失耗損43。0548 amu全外顯子測序價值，異亮氨酸則因為乙=基損失會出現(xiàn)29。0391 amu的耗損。